Retomando la electroforesis capilar.

Teoría química, procesos, reacciones, materiales y aparatos. Agua y electrólisis. El hidrógeno como combustible alternativo, sus procedimientos de obtención, almacenamiento, pilas de combustible, fusión fría, y temas relacionados
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alberttoy
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#21 Mensaje por alberttoy »

Eso tiene muy buen aspecto.

¿Como funciona?
Homer escribió:
Bueno, por lo menos el aparato ha quedado bonito:
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Homer
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#22 Mensaje por Homer »

¿El mecanismo? Es como un columpio, una mariconada. Estaba harto de romper capilares al manipular las muestras, así que ahora solo relleno los pocillos con una jeringa y los muevo con un servo. La campana de vidrio también salva muchas vidas.

Carlosolpe
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#23 Mensaje por Carlosolpe »

Hola Homer,
Preguntabas por el componente fluorescente del anticongelante, se trata de fluoresceina, es fácil de conseguir.
Me parece impresionante el trabajo que has hecho con la electroforesis.
Respecto a la fluoresceína, ten en cuenta que la intensidad de la fluorescencia depende del pH, no se si esto te puede estar influyendo en los picos, lo digo por que como no te cuadran...claro que entiendo que estás totalmente seguro del etiquetado de tus botes.
Si te esperabas un mayor enriquecimiento, puede que los picos que estas viendo no estén resueltos...
¿Cómo añades la muestra, sólida disuelta?, si es disuelta en qué la disuelves?
saludos

Carlosolpe
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#24 Mensaje por Carlosolpe »

Una posible variable es que estés viendo dos picos, uno resultado de la interacción del boro con la fluoresceina y otro resultado de la interacción del boro con la merbromina...es fácil descartar esta posibilidad, prueba a utilizar solo una de ellas y ver si siguen saliendo dos picos o uno....

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Homer
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#25 Mensaje por Homer »

Gracias Carlosolpe. Pues tienes razón, el anticongelante con hidróxido sódico tiene fluorescencia amarillo verdosa, en cambio con el ácido bórico simplemente refleja el violeta. Lo curioso es lo de la merbromina, que tiene algo de fluorescencia, pero unas gotas en el anticongelante y se enciende como una bombilla.

La muestra de ácido bórico está disuelta al 5% en agua destilada. Pongo el pocillo junto al capilar y le doy voltaje. He leído que no es el método más adecuado porque entra más cantidad del componente más ágil, y esto lógicamente distorsiona los resultados. Explicaría la anomalía, pero no sé, demasiado bonito para ser cierto. Pero si, tendré que montar otro sistema ¡lástima de columpio, con lo bien que iba!

Descartar la fluoresceína va a ser jodido de momento, porque lo que detecto es la oscuridad de la muestra, y si añado algo al anticongelante para subir el pH y que brille aumentará la conductividad, se formarán burbujas, y ¡plaf! muerte por embolia. Lo que se me ocurre es comprar etilenglicol puro para sustituir el anticongelante, pero habrá que ver si reacciona igual con la merbromina.

He intentado ver los isótopos del magnesio y sale esto:
Imagen
Parece una “separación mezclada”, un querer y no poder, un yenesecuá.

También he leído que la resolución no aumenta con la longitud del capilar (sorprendente), pero si con el campo eléctrico, así que he añadido un par de pasos más al multiplicador de tensión y… la he cagado, ahora se forman burbujas siempre.

La semana que viene voy a ver al Profe, a ver si por lo menos consigo saber de una vez por todas qué contienen esas muestras. Si, ya sé, haber empezado por ahí ¿no?

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baldo
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#26 Mensaje por baldo »

me he perdido la mitad de la peli, cuentamela:

- ¿que capilares usas?, ¿comerciales, o caseros?. habia comprado en dos ocasiones, en ambas no se que fue de ellos, si estan aqui o en madrid, ni donde.

- yo me canse de intentrarlo, fracaso total, se supone que un pocillo se llena a costa del otro, eso es lo 1º, , ni eso,,,

- si, se detectan huecos entre fluorescencia, lo que analizas desplaza al colorante. detectarlo es la ostia, supongo que con objetivos de microscopio, hay no llegue. excitarlo tambien jodio, UV contra vidrio,,, otra razon para usar cuarzo.

- conviene desgasear, embolias,,, jeringuilla pa tras tirar, y ya.

- despues esta el lio de los buffers, el de cabeza y cola, que no tienen por que ser iguales. no me creo nada de que la L no influya, a mayor L mas muestra cabra, digo yo,

- cuando tu bajar?,

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Homer
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#27 Mensaje por Homer »

Los capilares son caseros. Tubo de vidrio de 6mm al fuego hasta reblandecer, retirar de la llama y estirar a todo lo que dan los brazos. El estirón, cuanto más rápido más fino sale el capilar. El diámetro exterior queda entre 50 y 100 micras. El interior… a saber.

Es imposible detectar el cambio de volumen en los pocillos, el flujo es microminúsculo. Yo creo que la propia evaporación ambiental es más intensa.

Para el detector utilicé una lente de lector de CD’s. Tienen una distancia focal de milímetro y medio más o menos. El led es de los que venden en eBay por kilos, entre 395 y 400nm. Atraviesa el vidrio sin problemas.

El desgaseado con la jeringa lo tengo que probar, pero creo más bien que se trata de electrólisis. Aunque también es posible que los gases disueltos actúen de semilla.

Lo de la longitud tampoco lo entiendo, pero lo cierto es que la muestra se expande bastante al principio y luego migra plácidamente sin variación apreciable.

Mañana, con el permiso de la autoridad y si el tiempo lo permite, allí me planto.

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baldo
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#28 Mensaje por baldo »

si en vez de dos pocillos son dos gotitas sobre placas, una se rechupa, la otra crece, si estan coloreadas se veria, yo ni eso.
por poco no coincidimos.

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Homer
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#29 Mensaje por Homer »

Si, ya veo que lo de cultivar las relaciones sociales iba en serio :mrgreen:

Una mancha de un milímetro de diámetro sobre una servilleta de papel corresponde a unos 5mm de capilar. Yo creo que sobre una placa se evaporaría antes de llegar a apreciarlo.

Tuve suerte con la primera prueba: https://youtu.be/9_-PcHIvnI8 sino seguramente también habría abandonado. Utilicé agua destilada con unas gotas de detergente como tampón, y tinta sin aceite como muestra.

Carlosolpe
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Re: Retomando la electroforesis capilar.

#30 Mensaje por Carlosolpe »

En cromatografía, en ocasiones la resolución mejora al disolver la muestra en fase móvil, tal vez si disuelves en tu mezcla mejores algo...

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