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NotaPublicado: Dom Feb 24, 2019 9:38 pm 
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Registrado: Lun May 25, 2015 7:36 am
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País: España
Ciudad: Alcobendas
Hola Hommer,
Creo que puede ser interesante hacer un blanco, es decir inyectar una muestra sin el analito y ver la señal que te da.
Por otro lado, para integrar, lo ideal es que respetes la deriva de la linea base, es decir P1 debería estar más en los 34 que en los 37
Cuando dices que depende del tamaño de la muestra te refieres a concentración o a volumen??
ánimo y saludos


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NotaPublicado: Lun Feb 25, 2019 7:40 pm 
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Registrado: Dom Abr 30, 2006 2:07 pm
Mensajes: 2011
País: España
Ciudad: Sabadell
El algoritmo de análisis de la gráfica es de fabricación casera, todavía no está fino. Debería echar un vistazo por ahí, porque todo está inventado, pero… ¡que pereza!

Con el tamaño de la muestra me refiero al volumen. Utilizo la concentración saturada, cerca del 5% en agua. También he probado con ácido bórico disuelto en glicol en lugar de agua, con una concentración de casi el 20%. Curiosamente los resultados son opuestos. Aquí están las gráficas:

Imagen

Con el tiempo seguramente lo acabaré entendiendo… si me echáis una mano :D

Gracias.


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NotaPublicado: Lun Feb 25, 2019 8:51 pm 
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Registrado: Mar Sep 16, 2014 12:55 am
Mensajes: 832
País: españa
Ciudad: barcelona
Por un momento he pensado que entendía la gráfica y los P1 a P4. Pero no.

Es que no hay ni unidades ni magnitudes en los ejes :lol:


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NotaPublicado: Lun Feb 25, 2019 9:57 pm 
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Registrado: Lun May 25, 2015 7:36 am
Mensajes: 318
País: España
Ciudad: Alcobendas
Hola Hommer,
Muy interesantes gráficas.
Con la del glicol (como dsice alberttoy) no entiendo nada.
Pero con la del agua lo veo bastante claro.
Se aprecia claramente el frente del agua.
En la gráfica "escasa" el primer pico es debido al agua (y tal vez a algún isótopo de boro si es que da la casualidad de que no se separa del frente) y el segundo es debido a los dos isótopos de boro que no están resueltos (o solo a uno si está debajo del pico del agua).
En la tercera es evidente que la columna está saturada y por eso los picos están tan deformados.

1-El pico del boro es muy grande, tienes margen de sobra para bajar la concentración y mejorar mucho su forma (parece que está saturando la capacidad de la columna). En mi opinión mejorarás mucho la gráfica si bajas la concentración del boro (del 5% al algo entre el 2 y el 0,5%), tal vez así consigas resolver los picos.
2-Si bajas el volumen que inyectas, como mínimo a la mitad o incluso cuarta parte, conseguirás separar mejor el frente de agua del pico del boro y tendrás picos más estilizados.
No olvides hacer siempre un blanco con la misma cantidad de disolvente que estés utilizando, para poder identificar como mínimo que pico es debido a este.
Ánimo y a por ello!!


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NotaPublicado: Mar Feb 26, 2019 2:44 am 
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Registrado: Dom Abr 30, 2006 2:07 pm
Mensajes: 2011
País: España
Ciudad: Sabadell
¡Cómo que no hay unidades, cómo que no, cómo que nooooo! La gráfica de arriba a la derecha las tiene, no las repetí en todas por dos razones: por no aburrir y porque se me olvidó :lol:
Las ordenadas son los milivoltios que genera el sensor fotoeléctrico al paso de la fluoresceína. Las abscisas el tiempo, en unidades de 5 segundos.

P1 es el momento en que la primera parte de la muestra llega al sensor, y P2 cuando ya pasó. Como el capilar separa la muestra en dos partes, P3 y P4 son los momentos en que llega y se va la segunda parte. Estos dos “picos”, por llamarlos de alguna manera, aparecen invertidos porque la muestra no lleva fluoresceína, y bajan los milivoltios del sensor. Se supone que a mayor oscuridad más muestra, así que las áreas entre P1 y P2, y entre P3 y P4 son proporcionales a sendas partes de la muestra.

Si el área entre P1 y P2 fuese el 20% del área entre P3 y P4 sería la hostia, porque es la proporción entre el boro 10 (más ligero, llega antes) y el boro 11 (más pesado, llega con la lengua fuera) (o fuese). Pero no es así.

Voy a bajar la concentración a ver qué pasa.

Gracias amigos.


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NotaPublicado: Mar Feb 26, 2019 9:46 pm 
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Registrado: Mar Sep 16, 2014 12:55 am
Mensajes: 832
País: españa
Ciudad: barcelona
Jeje. Muy interesante.


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NotaPublicado: Mar Mar 05, 2019 5:34 pm 
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Registrado: Dom Abr 30, 2006 2:07 pm
Mensajes: 2011
País: España
Ciudad: Sabadell
Bajé la concentración hasta el 1% y salió esto:

Imagen

Como no lo veía claro bajé el volumen de las muestras a la mitad:

Imagen

Y repetí, repetí, repetí… como los peces en el río

Imagen

No fui capaz de identificar ningún patrón útil, así que suprimí el agua para volver a la idea original: “como el pH ácido inhibe la fluorescencia la cosa quedará menos complicada. Etilenglicol más fluoresceína como tampón, y tampón + bórico como muestra, así no habrá dudas de si el marcador se mezcla o no con la muestra.” A simple vista no se percibe diferencia en la fluorescencia, pero el sensor sí lo hace. Empecé de nuevo con una concentración del 5%, luego el 2.5%, 1.25%, y así sucesivamente en plan homeopático hasta llegar al 0,0390625% donde el ruido ya casi se confunde con la señal. Retrocedí hasta el 0,2% y empecé a probar con distintas dosis. En la última prueba comparé el boro empobrecido, enriquecido y natural:

Imagen

Y otra vez me encuentro en un callejón sin salida, no veo nada claro.


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