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NotaPublicado: Dom Nov 14, 2010 8:18 pm 
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Registrado: Sab Feb 07, 2009 11:51 pm
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Hola amigos virtuales,

Como la constancia vence lo que la dicha no alcanza, he retomado la construcción del equipo de electroforesis capilar ... con más experiencia y esperando aprender más sobre esta técnica.

Voy a ir colocando en este foro los resultados que vaya obteniendo, ya coloqué algo en el blogg

http://incoec.blogspot.com/

Se oyen sugerencia constructivas ... :wink:

Saludos

_________________
José G. Contreras V.
Laboratorio Incoquim
Caracas, Venezuela
http://laboratorio-incoquim.blogspot.com/


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NotaPublicado: Dom Nov 14, 2010 11:37 pm 
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la tecnica parece muy sencilla y prometedora.

se trada de un tubito capilar generalmnete de silice de 50 a 100um x 1m,
lo llenas y le metes tension, unos 20kv, dicen que las cosillas se mueven dentro.
si no me equivoque, el V interior es de 2mm3 a 8mm3, (1mm3=1ul=1mgr h2o), la muestra ha de ser entre 1/1000 y 1/100 de la longitud, digo yo, a menos muestra menos tienes para apreciar pero mas nitidez, es el clasico problema de la sensibilidad y selectividad, el sergi lo conoce.
si metemos 1/1000, se queda en unos 2 o 8 decimas mm cubicas, o ugr, o nL, si metemos orina, y queremos detectar algun producto que esta en pongamos, 1/1000 exagerando optimistamente, son unos 2 a 8 ngr, 10^-9gr,
me parece realmente dificil el detectarlo.
parece que se detecta con fluorescencia, que ponen en el bufer, y detectan zonas negras,

no me gusta la camisa de agua, los 20kv pueden elegir atravesar el cristal e ir por el agua,
se suele enrrollar y meter en aceite o silicona.
con un capilar casero no creo que lleges lejos, si es de 1 cuarta y de cristal, siempre se puede intentar curtirlo con una corrida con algo de fluoridrico,

lei que hay un voltage optimo, pasarse degrada elos picos, no se por que, quizas por el calor.

http://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis_capilar
http://www.files.chem.vt.edu/chem-ed/se ... ap-el.html


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NotaPublicado: Jue Nov 18, 2010 7:16 pm 
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Gracias baldo ... tienes razón con respecto al agua. Tengo unos 10 lt de aceite para transformadores, en esos no pasa ni coquito ...

Hoy hice una prueba para determinar el flujo electroforético de una sustancia orgánica ... fue todo un éxito :wink:
El capilar lo hice estirando un tubo de unos 4 mm de diámetro externo. El diámetro determinado del tubito fue de unos 200 micrones y lo coloqué entre dos recipientes tal como se indica en la foto :
Imagen

La fase mobil utilizada fue lauril sulfato de sodio ( 160 mg ); fosfato ácido de sodio ( 100 mg ) y unas gotas de amoníaco para hacer el pH ligeramente básico. De esta manera, se debería producir el movimiento electrocinético al migrar el LSNa hacia el cátodo.
Después de varias horas, se llenó el capilar con la fase movil.
Se me ocurrió utilizar azul de metileno y para cargarlo, le acerqué una gotica de la solución con AM y esta entró como perro por su casa ... unos 2 mm.
Para no hacer largo el cuento, le apliqué alto voltaje de un circuito con una bobina, el cual ya coloqué en este sitio en mi primer sobre electroforesis capilar ... me dí cuenta que de la bobina, salía un alto voltaje, pero negativo ... creo que invirtiendo un diodo que tiene el circuito, debería salir el voltaje positivo ...
La primera sorpresa esperada fue que el azúl de metileno, empezó a desplazarse hacia el ánodo ... :)
y la segunda es que se desdobló en 2 manchas lo cual indica que posíblemente es una mezcla de dos isómeros o compuestos ...

Con este experimento, encontré:
1. La bobina funciona para la EC como fuente de alto voltaje.
2. Que de la bobina estaba saliendo un voltaje negativo.
3. Una técnica nueva para inyectar la muestra.
4. El buffer funciona y genera el flujo electroosmótico.

Hasta la próxima ... Goyo

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José G. Contreras V.
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NotaPublicado: Jue Nov 18, 2010 7:52 pm 
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Para los electrónicos les agradezco si me pueden hechar una mano pues requiero que el voltaje salga positivo.
Y a propósito que tal son los duplicadores de voltaje ?

http://s5.tinypic.com/1t66jc.jpg


Mil gracias ... Goyo

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José G. Contreras V.
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NotaPublicado: Jue Nov 18, 2010 8:28 pm 
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en teoria es cambiar el diodo de sentido, pero,,,

si el primario es asimetrico, me refiero a todo o nada en una sola polarizacion, como suele ser el caso, incluso el de tu esquema, no otros de dos transistores y trafo con salida en medio.
pues estos tienen costumbre de dar una sobretension en la apertura, que es lo que aprovechamos, muy alta y breve, cuando esta en cerrado, en el secundario hay mucho tiempo abajo, pero poco abajo.
osea, que dando la vuelta al diodo no llegaremos muy lejos, hay que cambiar tambien la polaridad del trafo, o cambias el secundario o cambia el primario.


EDITADO
hiciera un experimento similar, no funciono, me saltaban chispitas por medio del capilar, y es que gaseaba la muestra y tampon y se formaban arcos, se arregla con vacio previo en jeringas.

en vez de pocillos use plaquitas de cobre, asomaban dos gotitas en cada extremo, deberia adelgazar una y engordar otra, pero nada de nada.

despues compre 10m de capilar de 75u de silice, el propio, antes de ebay, pero conoci al profe y me lio con sus inventos.


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NotaPublicado: Jue Nov 18, 2010 10:46 pm 
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Baldo, en primer lugar es mejor utilizar recipientes de plástico para evitar saltos de corriente.
Si te saltaban chispas era porque la concentración del buffer estaba muy alta y pasaba mucha corriente. O el diámetro era muy grande.
Un problema que encontré es que el capilar hay que tratarlo como si fuera un puerco-espin ... con mucho cuidado
La resolución de los "picos" no depende de la longitud del capilar así que con un capilar de 20 cm da buenos espectros. Es más en un artículo encontré capilares de 10 cm. Lo más importante es reducir el diámetro del capilar para reducir la corriente. En ocasiones una resistencia en serie ayuda.
Los electrodos que utilizo son de minas de bolígrafo, forradas con parafina y raspando la parafina del extremo del electrodo. También los de platino funcionan pero ...

Como ya encontré hacia donde migra el flujo electroforético, el siguiente paso es construir el detector. Si se utiliza surfactante catiónico el flujo es en sentido contrario.

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José G. Contreras V.
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NotaPublicado: Vie Nov 19, 2010 11:00 pm 
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Hoy estuve jugando con el incipiente equipo ... funcionó a cabalidad. Aunque parece sencillo, pasé casi 2 años trabajando en el sin éxito alguno ... pensando y pensando que podía estar pasando y con más experiencia y conocimiento de esta técnica porfín logre obtener una separación electroforética.
La fuente de poder tiene un voltaje de unos -12 Kv. Como el próximo paso es construir el detector y este normalmente se coloca del lado de tierra, es necesario tener en la fuente de poder -12 Kv y la de +12 Kv, pues dependiendo del análisis a realizar, las especies van o al cátodo o al ánodo. Voy a construir un circuito con las dos posibilidades de voltaje.
El detector que mejor me ha parecido es el oscilométrico; no toca la solución y es impermeable al alto voltaje ... tengo trabajo pa´rato ... :roll:

Saludos ... Goyo

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José G. Contreras V.
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NotaPublicado: Sab Nov 20, 2010 12:52 pm 
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Pensando en lo que me ocurrio al principio, el porque no obtenía el movimiento electroforético y como a baldo solo obtenía chispas dentro del capilar, a raíz de los nuevos resultados y que me corrijan los electrónicos es que la fuente de alto voltaje que construí fue con un flayback :roll:

Creo que con este flyaback se producían voltajes positivos y negativos y además mucha corriente, esto generaba que la solución no se moviera y se generara mucho calor.

Con el diseño con la bobina, obtuve -12 kV y debido a que utilicé un transformador menos potente, la potencia del alto voltaje fue menor. Ahora bien, es necesario construir otra fuente que me genere +12 kV, pues he llegado a la conclusión que son necesarios los 2 voltajes, pues la migración cambia de dirección hacia el ánodo o hacia el cátodo dependiendo del tipo de compuesto a analizar y lo que es importante es colocar el detector cerca a tierra siendo esta indistintamente el ánodo o el cátodo.

Con un oscilador operacional que me dé +12 y -12 Volt, pienso disparar transistores de potencia PNP o NPN respectivamente y dependiendo de la necesidad con un swiche conectar estos a la bobina. Cualquier mejora o idea es bienvenida.

Goyo

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José G. Contreras V.
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NotaPublicado: Sab Nov 20, 2010 6:12 pm 
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Hola amigos virtuales ...

Se me ocurrió el siguiente diseño para tener las dos fuentes de poder

Imagen

La otra posibilidad es utilizar un flayback, pero no se si el voltaje de salida es positivo y negativo, algo así ... este circuito ya lo he probado y funciona, lo que no sé es si con los diodos puedo seleccionar la polaridad del voltaje

Imagen

nota : A lo mejor los diodos están invertidos ... soy como los gladiadores, en la pelea voy pensando en el ataque :lol: :lol:

Les agradezco sus comentarios

Goyo

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José G. Contreras V.
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NotaPublicado: Sab Nov 20, 2010 11:36 pm 
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Yo vengo siempre atrasado, tendría que haberte preguntado cinco posteos mas arriba, este tema me gusta, me preocupa el hacer el capilar, no se pueden usar capilares de microhematocrito?

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