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NotaPublicado: Jue Ene 13, 2011 5:16 pm 
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anajesusa escribió:
Cada vez me sorprendo mas con estas pruebas, ayer a las 20h10 se cumplieron 24 horas que había expuesto un hisopo y un frasco con tierra a temperatura de 85º por 24hs, luego de eso cultivé en medio líquido ambas muestras, esta mañana tengo desarrollo en ambos cultivos. No es un desarrollo tan franco como las otras veces, pero es un desarrollo importante, aún no han hecho espuma y llevan casi 12 horas en estufa de 37º.


¿? entonces lo que haces es ver si hay resistencia. Con esas condiciones te va a salir cualquier bicho capaz de esporular. Si quisieras buscar un termófilo tendrías que ver el crecimiento en el medio a altas temperaturas no tomar una muestra y ponerla a 37º C.


anajesusa escribió:
Los cultivos no fueron hechos con agitación, dale contá como se hace sacar los bichos, porque voy a probar anaerobiosis


Pones entre 1-10 gramos de tierra en un bote con 100 mL de agua de peptona, PBS, suero salino,... hay diferentes protocolos. Lo pones en agitación vigorosa durante media hora. En ese líquido ya tienes microorganismos.


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NotaPublicado: Jue Ene 13, 2011 5:44 pm 
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Hola Crazy, gracias por responder. Si, en realidad lo que busco es resistencia, tengo la hipótesis que si algún bicho es capaz de resistir a condiciones muy adversas como en este caso, vacío por 11 días, y luego temperaturas de 85º esos bicho puestos en un gradiente de condiciones de la mas buena a la mas mala, van a ir mutando para desarrollar cada vez mas próximos al extremo de condiciones malas, estos parecen ser esporulados.
Solo es una idea, no me coman el hígado, por lo pronto nadie apostaba ni una rupia a que los bichos comunes del suelo sobrevivirían al vacío, ahora esos mismos aguantan temperaturas muy elevadas ayer no podía tocar con la mano los frascos, estaba tuto tuto eso...
Una cosa que no me cierra y no encaja con mi hipótesis es que la mayoría de los extremófilos son achaea y estos no parecen serlo.
Gracias por la técnica de extracción.
Hoy como tenía que esterilizar medios, metí una muestra de tierra en el autoclave y luego la puse en medio líquido, no debería sobrevivir nada no? o los esporulados se la bancan tambien?

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NotaPublicado: Vie Ene 14, 2011 2:14 am 
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anajesusa escribió:
Hola Crazy, gracias por responder. Si, en realidad lo que busco es resistencia, tengo la hipótesis que si algún bicho es capaz de resistir a condiciones muy adversas como en este caso, vacío por 11 días, y luego temperaturas de 85º esos bicho puestos en un gradiente de condiciones de la mas buena a la mas mala, van a ir mutando para desarrollar cada vez mas próximos al extremo de condiciones malas, estos parecen ser esporulados.
Solo es una idea, no me coman el hígado, por lo pronto nadie apostaba ni una rupia a que los bichos comunes del suelo sobrevivirían al vacío, ahora esos mismos aguantan temperaturas muy elevadas ayer no podía tocar con la mano los frascos, estaba tuto tuto eso...
Una cosa que no me cierra y no encaja con mi hipótesis es que la mayoría de los extremófilos son achaea y estos no parecen serlo.
Gracias por la técnica de extracción.
Hoy como tenía que esterilizar medios, metí una muestra de tierra en el autoclave y luego la puse en medio líquido, no debería sobrevivir nada no? o los esporulados se la bancan tambien?


Hay muchos extremómilos que son Bacteria: Thermus, Acidithiobacillus, Leptospirillum, Deinococcus,... y podría seguir con una lista muy extensa. Lo que pasa es que todas las Archaea son extremófilas y pej. todos los hipertermófilos, salvo un par de excepciones, son Archaea

Que yo sepa sólo se han encontrado 2 microorganismos hasta el momento que resistan ciclos de autoclave. Pej, la conocida como cepa 121 es capaz de aguantar 2 horas a 130º C, aunque necesita un medio algo más frío para seguir reproduciéndose


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NotaPublicado: Vie Ene 14, 2011 12:44 pm 
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Estos microorganismos que soportan los ciclos de autoclave son comunes? mi frasco, el que puse los 15 minutos en autoclave dio positivo!!!
Tengo unas muestras de americio, es una sustancia radiactiva de fuerte emisión alfa, hace algún tiempo hice unas pruebas colocando ese material en cápsulas de petri inoculadas con E. coli, la zona expuesta a la radiación no desarrollaba, me gustaría hacer un par de pruebas de este tipo con los sobrevivientes de estos experimentos que hice con calor y vacío, pero tiene que ser distinto a lo que hice antes, dado que lo que quiero saber es si en estado de espora, es capaz de soportar la radiación, algo así como un hisopo bien chiquito al que se lo sometería a radiación alfa por un par de días y luego trataría de ver si desarrolla. Este experimento presenta varias dificultades, la capa bacteriana debe ser muy finita porque las alfa son poco penetrantes y la muestra debería ser irradiada por todos los flancos, también se me complica esterilizar ese material, si se les ocurre alguna idea, bienvenida.

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NotaPublicado: Vie Ene 14, 2011 1:03 pm 
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anajesusa escribió:
Estos microorganismos que soportan los ciclos de autoclave son comunes? mi frasco, el que puse los 15 minutos en autoclave dio positivo!!!


Pero dio positivo después al cultivar a 37º C, no? Eso indica que ya había esporas en el suelo. De todas formas, eso lo hiciste con la tierra? porque para suelos y sedimentos es frecuente que se realicen un par de ciclos de autoclave, el segundo después de haber dejado enfriar el material. Entre otras cosas por eso de eliminar los que esporulan

respecto a lo de la radiación, estoy mal de tiempo pero...
1.- haces unas placas como las de E. coli
2.- si hay halo es que al menos hay inhibición del crecimiento
3.- con bisturí estéril se retira el halo o se toma muestra con cuidado de no tocar el resto de la placa
4.- se pone la muestra en placa nueva sin el americio

si hay crecimiento es que resistió sino , no


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NotaPublicado: Vie Ene 14, 2011 1:39 pm 
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El_Crazy_Xabi escribió:
Pero dio positivo después al cultivar a 37º C, no? Eso indica que ya había esporas en el suelo. De todas formas, eso lo hiciste con la tierra? porque para suelos y sedimentos es frecuente que se realicen un par de ciclos de autoclave, el segundo después de haber dejado enfriar el material. Entre otras cosas por eso de eliminar los que esporulan

respecto a lo de la radiación, estoy mal de tiempo pero...
1.- haces unas placas como las de E. coli
2.- si hay halo es que al menos hay inhibición del crecimiento
3.- con bisturí estéril se retira el halo o se toma muestra con cuidado de no tocar el resto de la placa
4.- se pone la muestra en placa nueva sin el americio

si hay crecimiento es que resistió sino , no

Si, los cultivos después de agredir con los factores físicos los hago a 37, en medio líquido. El mecanismo para que un bicho que esta en estado "normal" pase a estado esporulado es rápido? me refiero a que apenas las condiciones desmejoran el bicho esporula en pocos segundos?
Me gusta el planteo de la prueba con radiación que proponés Crazy, hacer la irradiación y del halo de inhibición sacar el material para recultivar.
Estas son fotos de la prueba con coli
Imagen
Imagen
La muestra de americio y la placa de petri después de 24h de incubación
Algo que me olvidaba comentar y creo que es importante, hice la prueba de la catalasa y da positivo, asi que descartaría clostridim para inclinarme por bacillus.

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NotaPublicado: Vie Ene 14, 2011 5:23 pm 
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Parece que todo se encaja, hoy pondré unas fotos del bicho,tiene espora central, gram positivo, catalasa positivo y móvil esto último me descarta Bacillus anthracis que era uno de mis temores, ademas concuerda con la realidad histórica de ese campo de donde saqué la tierra, nunca hubo ni mancha ni carbunco.

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NotaPublicado: Vie Ene 14, 2011 7:07 pm 
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Si crecen tras pasar por autoclave, haz una de estas dos cosas:

1.-Tira el autoclave y compra uno que sea autoclave.

2.- Revisa el proceso de manipulación porque hay contaminación "seguro".

:D


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NotaPublicado: Vie Ene 14, 2011 7:42 pm 
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Je je, me acordaba de vos cuando vi que sobrepasaron la prueba, mi autoclave es una olla a presión que anda muy bien, a veces tengo miedo que vuele porque los chorros de vapor intermitente son bastante atemorizantes.
Bien pues parece que estos bacillus se la aguantan en el autoclave, al menos por un tiempo, dejo un documento http://www1.uprh.edu/salterns/geomicrob ... sporas.pdf ver página 19, ahi esta documentado, es mas con calor seco aguantan mas. Recién descubro este trabajo y estos profesores universitarios ya han hecho varias de las pruebas que estoy haciendo yo. Este bichito me esta gustando :D ahora trabajaré directamente con cepas de él para ver que mas aguanta.

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NotaPublicado: Vie Ene 14, 2011 9:21 pm 
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Fíjate en la gráfica y observa como las esporas no aguantan calor húmedo a 130 grados

Tu "autoclave" no está alcanzando esa temperatura porque le falta presión. Tendrías que poner un manómetro y manipular el peso de la válvula hasta conseguir presión adecuada que aumente temperatura de ebullición a 130.

Pero si hay que aumentar mucho una olla es peligrosa.....

125 grados media hora o 130- 20 minutos se carga practicamente todo (bueno, menos priones)


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