Micrótomo de hechura casera (avances)

[anajesusa]

Efectivamente Petersen, aquí hay un matadero municipal donde se faena a diario, ya me haré una escapada una mañana con el frasco de formol y me traigo varias muestras frescas, también pensaba disecar alguna rata, que son plaga en el barrio, (solo cuando muera de muerte natural).
Para tejido nervioso creo recordar una técnica de golgi que era de impregnación argéntica, hace muchos años hice anatomía patológica y después en la practica diaria ya no se ve mas nada, así que quedó olvidado, además había una tinción de PAS que no puedo recordar para que era, con ácido peryódico.
Para Armando en el primer link que puso petersen en el libro de histología practica dice como preparar hematoxilina a partir de polvo, leí medio rápido pero creo que e 1 gr en 100 de acético al 2%

[Armando]

Hola Cesar.

Esta tarde la he tenido casi entera para mi y me he dedicado a preparar los tintes (me han quedado las manos que parecen un catálogo de colores)
Te digo todos los que tengo ya:
Caseros:
- Safranina
- Acetocarmín
- Lugol
De los que compré un gramo en seco:
- Azul de Metileno
- Rojo neutro
- Verde Brillante
- Fucsina Básica
- Fucsina Ácida
- Hematoxilina
- Giemsa
- Cristal Violeta
- Eosina

También preparé alcohol absoluto, por el viejo método del sulfato de cobre, y puse una cebolla en remojo.
Mañana más.

Salud

[anajesusa]

Que bueno, creo que tenes varios colorantes como para probar y hacer las combinaciones.
Hay una coloración muy tradicional para bacterias se llama coloración de Gram Nicolle, es la que da esa clasificación tan común de bacterias gram positivas o negativas, mañana en el laboratorio voy a revisar si el primer colorante que es el violeta de genciana puede sustituirse por el cristal violeta del que dispones, ademas lleva lugol un decolorante hecho con alcohol y acetona y zafranina.
Saludos

[anajesusa]

Bueno, me ha llevado como 15 minutos llegar hasta acá me hace acordar a mis épocas de Packet radio...
Hice las primeras pruebas con tejidos animales, sacrifiqué a mi gato y tengo varios tejidos fue bromita no afilar los colmillos esos incansables cuidadores de los animalitos, en definitiva saque las víceras de un pollo que venían en una bolsita en su interior congelados. Pude hacer los tacos de parafina bastante bien, quedaron muy bien incluidos los tejidos y los cortes aunque no son lo máximo son bastante aceptables, pude ver perfectamente las fibras de musculo liso del corazón del pollo, no hice coloraciones aún, porque recién estoy probando, estas prácticas no las hice nunca, ni siquiera estuve en un laboratorio de anatomía patológica, asi que paciencia, pasa que hay que deshidratar los tejidos para incluirlos en parafina luego los cortes, pegar los cortes en los portas con albúmina, un proceso de rehidratación , coloración con HE y deshidratación nuevamente para guardarlos definitivamente.
Saludos

[Armando]

Gracias Cesar por tus esfuerzos, de los que muchos estamos aprendiendo a explorar el misterioso mundo de lo ínfimo.

Salud

[Goyo2009]

Hola Cesar,
Disfruto con tus ocurrencias, ... por otra parte, podrías colocar una foto sobre como haces el corte con una navaja de afeitar ? creo que es más dificil que hacer el microtomo .
Voy a visitar ti pueblo ... con Google earth.

Goyo

[Rovellat]

Hola anajesusa

He estado pensando sobre lo del cristal, y creo que te sería suficiente pegar dos bandas laterales de cristal, algo así como dos portas, a la pieza esta torneada que tienes, y la muestra en medio, así podrías deslizar la navaja, apoyándola en ambos cristales, lo cual te evitaría tener que agujerear el cristal, y para pegar el cristal al aluminio, pues una gota de pegamento de espejo retrovisor al parabrisas del coche, (apoyando las dos tiras de cristal en un tercer cristal durante su pegado para que estén en el mismo plano).

Saludos.

[anajesusa]

Hola gente, indefectiblemente voy a tener que poner el vidrio, sea como dice Rovellart o probando la técnica de agujerear que colgaron por acá, la navaja es muy filosa y lastima el aluminio. Tengo varias fotos y un video para Goyo que pidió ver como cortaba, es algo para el aficionado no le pidamos peras al olmo tampoco, los cortes de mínimo espesor son como de 30 micrones (3 rayitas del micrómetro)
Estos son los órganos del gato... digo del pollo, estan en formol al 10% para fijar

En esta imagen pueden verse los tubos con alcohol a distintos porcentajes hasta llegar al alcohol absoluto, en este caso estoy preparando un tallo vegetal a ver que sale, el frasco de tapa azul (que tapa azul?, el frasco de la derecha ) tiene el xileno, el tiempo en cada tubo es de 5 minutos y en el xileno igual

Luego del xileno la muestra se pasa a parafina que se ha calentado hasta que este bien líquida, ojo cuando largan el tejido al tubo porque se producen proyecciones de parafina el xileno es muy volátil y se evapora, el tejido en el interior burbujea, se deja una media hora en la parafina caliente (para que se mantenga asi puse el tubo sobre un foco encendido

Transcurrido el tiempo se preparan los tacos, con una tira de papel rodeando alguna tapa que entre mas o menos justo en el receptaculo del microtomo

Se acomoda el tejido en el receptáculo y se llena con parafina fundida


Luego se recorta el taco en forma de pirámide truca y se lo pone al micrótomo (obviamente cuando esta la parafina bien dura, conviene dejarlo en freezer una hora)

Puse una moneda en el fondo del receptáculo para que empuje parejo el vástago del micrómetro.

En esta última imagen hay un taco con un trozo de corazón del que saque algunas muestras.
El video del corte pueden verlo aca: http://www.youtube.com/watch?v=_VO5Tjxjs6o
Puede haber errores de técnica solo estoy probando
Una imágen del vegetal que se ve en las fotos sin teñir ni rehidratar ni na, como salió fue al miscroscopio

Saludos

[Goyo2009]

OK, Cesar ya entendí la idea. Un científico venezolano Fernandez Morán, patentó una cuchilla de diamante lo cual le dió un reconocimiento mundial.
El microtomo que he visto trabajando tiene una manivela que al girar, adelanta el tornillo y simultáneamente pasa una cuchilla supongo que de acero. Algo más sofisticado, pero con tu microtomo con un poco de práctica creo que podrás lograr buenos cortes.
Vi el video ... si colocas el tornillo micrométrico en una prensa, podrás manipular mejor la navaja.

Gracias por el dato.

Goyo

[Rovellat]

Para anajesusa y otros:

Veo que os lanzais a preparar muestras, y con todo el trabajo que llevan y lo delgado del corte, donde come uno comen dos, digo donde se prepara una muestra, se preparan dos o mas, por el mismo trabajo. Dicho de otro modo, si preparas una pata de araña para verla al microscopio, pues que las arañas tienen ocho patas.

Yo por mi parte, que no tengo ni zorra de tintes ni de cortes, ni de lo que es lo se ve por el microscopio, podría hacer unas bonitas cajas de madera con reminiscencias retro, para archivar las muestras, eso si, siempre que sean no perecederas, y se acompañen de amplia ficha explicativa de que es lo que se ve, vamos como para poder distinguir una cristalización de sal, de ADN de mamut, por poner un ejemplo.

Saludos.